細胞凍結

 

細胞凍結とは

細胞凍結とは、生物学や研究において、細胞を非常に低温で保存するプロセスのことを指します。細胞凍結は、細胞を一時的に凍結し、融解後に使用されます。細胞凍結は、細胞の生存期間を延長し、異なる時点で実験などに使用するために細胞の保存を可能にします。

 

細胞凍結に用いられる細胞凍結装置や容器の例

細胞凍結には、適切な冷却速度を確保し、細胞を効果的に凍結および保存するためにさまざまな装置や容器が使用されます。

 

冷凍保存装置(フリーザー)

液体窒素タンク: 液体窒素は非常に低い温度を提供し、細胞を急速に冷却できます。ただし、操作が特に慎重でなければならず、窒素の取り扱いには注意が必要です。

 

-80℃冷凍庫: 一般的な冷凍庫は比較的低い温度を提供し、細胞の保存に使用されます。安定した冷却速度を確保することができます。

 

冷却速度制御装置

プログラムフリーザー(コントロールレートフリーザー: 冷却速度を制御できる装置で、事前に設定された冷却プログラムに基づいて細胞を凍結します。液体窒素を使用するものや、液体窒素を必要としないものもあります。ストレックスのCytoSAVERは液体窒素不要のプログラムフリーザーです。

 

凍結容器: 特定の冷却速度を確保するために使用される容器やプレートがあります。これらは、液体窒素やプログラムフリーザーと組み合わせて使用されることがあります。

 

絶縁体や断熱材

断熱フォームやイソプロパノールチャンバー: 凍結中の細胞を周囲の温度変化から守り、冷却速度を制御するために使用される絶縁体です。

 

細胞凍結バッグ

細胞凍結バッグ: 冷却プロセスを容易にするために、凍結が始まると同時に細胞を冷却するバッグが使用されます。

 

これらの装置や容器、方法は、特定の研究目的や細胞の種類によって選択されます。目的に応じて適切な冷却速度や保存条件を保つことが重要です。

 

細胞凍結の方法とプロトコル

冷凍保存の手順

冷凍プロトコルに進む前に、自身と細胞を守るために必要な予防策を講じることが不可欠です。 常に個人用の保護具を身につけ、全ての手順を無菌的手法で行います。 細胞に触れる機器や実験材料は、確実に滅菌されていることを確認します。 層流フード内での作業により、コンタミネーションのリスクを最小限に抑えた環境を構築します。

 

培地の交換

凍結プロトコルの最初の段階では、細胞を冷凍保存のために準備します。 まず、細胞を遠心分離して培養容器の底に集めます。 次に、使用済み培地を注意深く取り除き、適切なバッファーで細胞を洗浄し、適切な冷凍培地を入れた冷凍バイアルに再懸濁します。 この冷凍培地には、ジメチルスルホキシド(DMSO)やグリセロールなどの冷凍保護剤が含まれている必要があります。 冷凍培地の選択は、細胞の種類によって異なります。

 

冷凍プロセス

冷凍プロセス自体が、細胞の生存と回復において重要な役割を果たします。 細胞が冷却される速度は、完全性に大きな影響を与えます。急激な温度低下は、細胞内の氷の形成につながり、細胞膜を損傷する可能性があります。 一方で、冷却速度が遅いと、塩濃度が高くなり、化学的毒性が生じる可能性があります。

最適な冷却速度は通常、毎分-1℃前後です。 ただし、細胞膜の透過性や表面対体積比など、さまざまな要因を考慮することが重要です。 安定した結果を得るためには、制御された速度の冷凍装置を使用し、温度を徐々に下げることが有効です。 冷凍速度制御装置には液体窒素を使用するものもありますが、マイコプラズマ汚染のリスクや問題を引き起こす可能性があります。 たとえば、Strex CytoSAVERプログラムフリーザーFZシリーズは、液体窒素を使用しないソリューションで、冷凍プロセスを簡素化します。

プログラムフリーザーを使用できない場合は、イソプロパノールチャンバーや断熱フォームを利用することもできます。 細胞を入れたクライオバイアルをこのようなセットアップに入れ、-80℃のフリーザーに一晩放置すると、熱伝導を遅くすることにより、推奨されている毎分-1℃の冷却速度を模倣できます。 ただし、この冷凍方法では結果に一貫性がないことに留意することが重要です。

 

冷凍保存

細胞が冷凍したら、-80℃フリーザーや液体窒素タンクなどの長期保存設備に速やかに移します。 移送中に、細胞の冷凍状態を維持するためにドライアイスを使用することが推奨されます。 解凍すると、クライオバイアルの取り扱いに慎重に注意する必要があります。 細胞を使用する準備ができたら、室温で急速解凍することができます。

 

細胞凍結 – まとめ

細胞凍結を効果的に行い保存するためには、最適な凍結プロトコルに厳密に従うことが不可欠です。本記事で紹介したガイドラインに従い、細胞培養業者から提供される具体的な指示に従うことで、細胞の生存率を向上させ、将来の研究においても細胞の機能性を保持できます。

Strex CytoSAVER プログラムフリーザー FZ シリーズに関する更なる情報やご質問があれば、お気軽にお問い合わせください。より詳しい情報を提供し、お客様の特定のニーズに適した凍結保存ソリューションを見つけるお手伝いをいたします。

一貫性のある凍結プロトコルを採用し、研究用凍結装置であるStrex CytoSAVER プログラムフリーザー FZ シリーズなどの先進的な凍結技術を活用することで、凍結細胞の品質を確保し、研究の可能性を最大限に引き出し、貴重な細胞培養物を将来の実験のために保管できます。

ストレックス社は、信頼性の高い凍結保存技術の重要性を理解し、お客様のニーズに対応する革新的なソリューションを提供しています。培養細胞の凍結保存の最適なソリューションを提供します。

 

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